Santo Spirito est une église dont l'édifice actuel est en grande partie une reconstruction de 1498-1504.
Il possède un portail de la Renaissance remarquable de Baldassarre Peruzzi, tandis que l'intérieur abrite de nombreuses œuvres d'art. Parmi celles-ci figurent des œuvres d’Il Sodoma dans la chapelle des Espagnols, une toile avec le miracle de Sainte-Hyacinthe de Francesco Vanni dans le transept droit entourée de fresques de Ventura Salimbeni, une rare crèche en terre cuite d’Ambrogio della Robbia, Quatre Saints de Rutilio Manetti ( pilastres flanquant le maître-autel) et, dans l'abside, une Pentecôte de Giuseppe Nicola Nasini.

Dans la sacristie, où se trouvait autrefois le cloître, se trouve une fresque de 1516 de Fra Paolo da Pistoia.